A Pasteur-pipetták működési elve elsősorban a gravitáció{0}}vezérelt áramláson és a kapilláris hatáson alapul, valamint a légnyomás-különbségek kézi szabályozásán alapul, hogy megkönnyítse a folyadékok felszívását és továbbítását.
Kézi szívásszabályozás: A kezelő a pipetta széles végét szívja be, -akár szóban, akár egy segédgumi izzóval-, hogy negatív nyomást hozzon létre a csőben, és ezáltal folyadékot szívjon be a finom hegybe.
Gravitációs -Meghajtott adagolás: a szívás felszabadulását követően a folyadék a gravitáció hatására természetesen kifolyik; az adagolást a pipettatest finom összenyomásával vagy a fogadóedény megdöntésével is elősegíthetjük.
Cseppek reprodukálhatósága: A "cseppek milliliterenkénti" arányának kalibrálásával a pipetta hozzávetőleges mennyiségi átvitelt tesz lehetővé, így alkalmas olyan eljárásokra, amelyek megismételhetőséget igényelnek, nem pedig abszolút pontosságot.
Sterilitásbiztosítás: Használat előtt egy vattadugót helyezhet a széles végébe, és sterilizálhatja, hogy megakadályozza a mikrobiális szennyeződést a kezelés során,{0}}ez a gyakorlat különösen gyakori a mikrobiológiai kísérletekben.